សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ កំណែកម្មវិធីរុករកដែលអ្នកកំពុងប្រើមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានលទ្ធផលល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកំណែថ្មីជាងនៃកម្មវិធីរុករករបស់អ្នក (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងកំពុងបង្ហាញគេហទំព័រដោយមិនចាំបាច់រចនាបថ ឬ JavaScript ទេ។
ការលូតលាស់របស់អតិសុខុមប្រាណនៅក្នុងរបួសជារឿយៗបង្ហាញរាងវាជាស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ ដែលរំខានដល់ការព្យាបាល និងពិបាកលុបបំបាត់ចោល។ បង់រុំប្រាក់ថ្មីអះអាងថាអាចប្រយុទ្ធប្រឆាំងនឹងការឆ្លងមេរោគមុខរបួស ប៉ុន្តែប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ និងប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលឯករាជ្យនៃការឆ្លងមេរោគរបស់វាជាទូទៅមិនត្រូវបានគេដឹងនោះទេ។ ដោយប្រើគំរូស្រទាប់ជីវសាស្ត្រក្នុងវីត្រូ និងក្នុងវីវ៉ូនៃ Staphylococcus aureus និង Pseudomonas aeruginosa យើងរាយការណ៍ពីប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំបង្កើតអ៊ីយ៉ុង Ag1+; បង់រុំ Ag1+ ដែលមានអាស៊ីតអេទីឡែនឌីអាមីនតេត្រាអាសេទិក និងប៊ីនហ្សេថូនៀមក្លរួ (Ag1+/EDTA/BC) និងបង់រុំដែលមាននីត្រាតប្រាក់ (Ag oxysalts) ដែលផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag1+, Ag2+ និង Ag3+ ដើម្បីប្រយុទ្ធប្រឆាំងនឹងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រមុខរបួស និងឥទ្ធិពលរបស់វាទៅលើការព្យាបាល។ បង់រុំ Ag1+ មានឥទ្ធិពលតិចតួចបំផុតលើស្រទាប់ជីវសាស្ត្រមុខរបួសនៅក្នុងវីត្រូ និងក្នុងសត្វកណ្ដុរ (C57BL/6j)។ ផ្ទុយទៅវិញ អំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន និងបង់រុំ Ag1+/EDTA/BC បានកាត់បន្ថយចំនួនបាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងជីវហ្វីមនៅក្នុងវីត្រូ និងបានបង្ហាញពីការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃសមាសធាតុបាក់តេរី និង EPS នៅក្នុងជីវហ្វីមរបួសកណ្ដុរ។ បង់រុំទាំងនេះមានឥទ្ធិពលខុសៗគ្នាលើការព្យាបាលរបួសដែលឆ្លងមេរោគ និងមិនឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម ដោយបង់រុំអំបិលដែលមានអុកស៊ីសែនមានឥទ្ធិពលច្រើនជាងលើការបង្កើតឡើងវិញនូវស្រទាប់ខាងក្រៅ ទំហំរបួស និងការរលាកបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការព្យាបាលត្រួតពិនិត្យ និងបង់រុំប្រាក់ផ្សេងទៀត។ លក្ខណៈសម្បត្តិរូបវិទ្យា-គីមីផ្សេងៗគ្នានៃបង់រុំប្រាក់អាចមានឥទ្ធិពលខុសៗគ្នាលើជីវហ្វីមរបួស និងការព្យាបាល ហើយរឿងនេះគួរតែត្រូវបានពិចារណានៅពេលជ្រើសរើសបង់រុំសម្រាប់ព្យាបាលរបួសដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម។
របួសរ៉ាំរ៉ៃត្រូវបានកំណត់ថាជា "របួសដែលមិនអាចវិវឌ្ឍទៅដំណាក់កាលធម្មតានៃការជាសះស្បើយបានតាមលំដាប់លំដោយ និងទាន់ពេលវេលា"។ របួសរ៉ាំរ៉ៃបង្កើតបន្ទុកផ្លូវចិត្ត សង្គម និងសេដ្ឋកិច្ចសម្រាប់អ្នកជំងឺ និងប្រព័ន្ធថែទាំសុខភាព។ ការចំណាយប្រចាំឆ្នាំរបស់ NHS លើការព្យាបាលរបួស និងជំងឺផ្សំគ្នាត្រូវបានប៉ាន់ប្រមាណថាមានចំនួន 8.3 ពាន់លានផោនក្នុងឆ្នាំ 2017–182។ របួសរ៉ាំរ៉ៃក៏ជាបញ្ហាបន្ទាន់មួយនៅសហរដ្ឋអាមេរិកផងដែរ ដោយ Medicare ប៉ាន់ប្រមាណថាថ្លៃដើមប្រចាំឆ្នាំនៃការព្យាបាលអ្នកជំងឺដែលមានរបួសមានចំនួន 28.1–96.8 ពាន់លានដុល្លារ3។
ការឆ្លងមេរោគគឺជាកត្តាចម្បងមួយដែលរារាំងការជាសះស្បើយនៃរបួស។ ការឆ្លងមេរោគច្រើនតែបង្ហាញជាជីវហ្វីម ដែលមានវត្តមាននៅក្នុង 78% នៃរបួសរ៉ាំរ៉ៃដែលមិនជាសះស្បើយ។ ជីវហ្វីមបង្កើតឡើងនៅពេលដែលអតិសុខុមប្រាណភ្ជាប់ជាមួយផ្ទៃដែលមិនអាចត្រឡប់វិញបាន ដូចជាផ្ទៃរបួស ហើយអាចប្រមូលផ្តុំគ្នាដើម្បីបង្កើតជាសហគមន៍ផលិតប៉ូលីមែរក្រៅកោសិកា (EPS)។ ជីវហ្វីមរបួសត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃការឆ្លើយតបរលាកដែលនាំឱ្យមានការខូចខាតជាលិកា ដែលអាចពន្យារពេល ឬការពារការជាសះស្បើយ4។ ការកើនឡើងនៃការខូចខាតជាលិកាអាចបណ្តាលមកពីសកម្មភាពកើនឡើងនៃម៉ាទ្រីសមេតាឡូប្រូតេណាស កូឡាជែនណាស អេឡាស្តេស និងប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម5។ លើសពីនេះ កោសិការលាក និងជីវហ្វីមខ្លួនឯងគឺជាអ្នកប្រើប្រាស់អុកស៊ីសែនខ្ពស់ ហើយដូច្នេះអាចបណ្តាលឱ្យមានកង្វះអុកស៊ីសែនក្នុងជាលិកាក្នុងតំបន់ ដែលធ្វើឱ្យកោសិកាបាត់បង់អុកស៊ីសែនសំខាន់ៗដែលត្រូវការសម្រាប់ការជួសជុលជាលិកាប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព6។
ជីវហ្វីមដែលចាស់ទុំមានភាពធន់នឹងថ្នាំសម្លាប់មេរោគខ្ពស់ ដែលតម្រូវឱ្យមានយុទ្ធសាស្ត្រខ្លាំងក្លាដើម្បីគ្រប់គ្រងការឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម ដូចជាការព្យាបាលដោយមេកានិច បន្ទាប់មកការព្យាបាលដោយថ្នាំសម្លាប់មេរោគដែលមានប្រសិទ្ធភាព។ ដោយសារតែជីវហ្វីមអាចបង្កើតឡើងវិញបានយ៉ាងឆាប់រហ័ស ថ្នាំសម្លាប់មេរោគដែលមានប្រសិទ្ធភាពអាចកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការបង្កើតឡើងវិញបន្ទាប់ពីការវះកាត់យកស្បែកចេញ7។
ប្រាក់ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់កាន់តែខ្លាំងឡើងនៅក្នុងបង់រុំប្រឆាំងនឹងមេរោគ ហើយជារឿយៗត្រូវបានគេប្រើជាការព្យាបាលជួរទីមួយសម្រាប់របួសដែលឆ្លងមេរោគរ៉ាំរ៉ៃ។ មានបង់រុំប្រាក់ជាច្រើនដែលមានលក់នៅលើទីផ្សារ ដែលបង់រុំនីមួយៗមានសមាសធាតុប្រាក់ កំហាប់ និងម៉ាទ្រីសមូលដ្ឋានខុសៗគ្នា។ ការរីកចម្រើននៃខ្សែដៃប្រាក់បាននាំឱ្យមានការអភិវឌ្ឍខ្សែដៃប្រាក់ថ្មី។ ទម្រង់លោហធាតុនៃប្រាក់ (Ag0) គឺអសកម្ម។ ដើម្បីសម្រេចបាននូវប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងមេរោគ វាត្រូវតែបាត់បង់អេឡិចត្រុងដើម្បីបង្កើតជាប្រាក់អ៊ីយ៉ុង (Ag1+)។ បង់រុំប្រាក់បែបប្រពៃណីមានសមាសធាតុប្រាក់ ឬប្រាក់លោហធាតុ ដែលនៅពេលដែលប៉ះពាល់នឹងអង្គធាតុរាវ នឹងរលួយដើម្បីបង្កើតជាអ៊ីយ៉ុង Ag1+។ អ៊ីយ៉ុង Ag1+ ទាំងនេះមានប្រតិកម្មជាមួយកោសិកាបាក់តេរី ដោយយកអេឡិចត្រុងចេញពីសមាសធាតុរចនាសម្ព័ន្ធ ឬដំណើរការសំខាន់ៗដែលចាំបាច់សម្រាប់ការរស់រានមានជីវិត។ បច្ចេកវិទ្យាដែលមានប៉ាតង់បាននាំឱ្យមានការអភិវឌ្ឍសមាសធាតុប្រាក់ថ្មីមួយគឺ Ag oxysalts (ប្រាក់នីត្រាត Ag7NO11) ដែលត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងបង់រុំរបួស។ មិនដូចប្រាក់បែបប្រពៃណីទេ ការរលួយនៃអំបិលដែលមានអុកស៊ីសែនបង្កើតស្ថានភាពប្រាក់ដែលមានវ៉ាឡង់ខ្ពស់ជាង (Ag1+, Ag2+ និង Ag3+)។ ការសិក្សានៅក្នុងវីត្រូបានបង្ហាញថា អំបិលប្រាក់ដែលមានអុកស៊ីសែនក្នុងកំហាប់ទាបមានប្រសិទ្ធភាពជាងប្រាក់អ៊ីយ៉ុងតែមួយ (Ag1+) ប្រឆាំងនឹងបាក់តេរីបង្កជំងឺដូចជា Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus និង Escherichia coli8,9។ បង់រុំប្រាក់ប្រភេទថ្មីមួយទៀតរួមមានគ្រឿងផ្សំបន្ថែម គឺអាស៊ីតអេទីឡែនឌីអាមីនតេត្រាអាសេទិក (EDTA) និងប៊ែនហ្សេថូនៀមក្លរួ (BC) ដែលត្រូវបានរាយការណ៍ថាកំណត់គោលដៅជីវហ្វីម EPS ហើយដោយហេតុនេះបង្កើនការជ្រៀតចូលនៃប្រាក់ចូលទៅក្នុងជីវហ្វីម។ បច្ចេកវិទ្យាប្រាក់ថ្មីទាំងនេះផ្តល់នូវវិធីថ្មីៗដើម្បីកំណត់គោលដៅជីវហ្វីមរបួស។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ផលប៉ះពាល់នៃថ្នាំសម្លាប់មេរោគទាំងនេះទៅលើបរិស្ថានរបួស និងការព្យាបាលដែលមិនពឹងផ្អែកលើការឆ្លងមេរោគគឺមានសារៈសំខាន់ដើម្បីធានាថាពួកវាមិនបង្កើតបរិយាកាសរបួសមិនអំណោយផល ឬពន្យារពេលការព្យាបាល។ ការព្រួយបារម្ភអំពីជាតិពុលប្រាក់ក្នុងវីត្រូត្រូវបានរាយការណ៍ជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់ជាច្រើន10,11។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ជាតិពុលក្នុងវីត្រូមិនទាន់បានបកប្រែទៅជាជាតិពុលក្នុងវីវ៉ូនៅឡើយទេ ហើយបង់រុំ Ag1+ ជាច្រើនបានបង្ហាញពីទម្រង់សុវត្ថិភាពល្អ12។
នៅទីនេះ យើងបានស៊ើបអង្កេតពីប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំ carboxymethylcellulose ដែលមានរូបមន្តប្រាក់ថ្មីប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមមុខរបួសនៅក្នុង vitro និងក្នុង vivo។ លើសពីនេះ ផលប៉ះពាល់នៃបង់រុំទាំងនេះទៅលើការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ និងការព្យាបាលដោយមិនគិតពីការឆ្លងមេរោគត្រូវបានវាយតម្លៃ។
បង់រុំទាំងអស់ដែលប្រើគឺមានលក់នៅលើទីផ្សារ។ បង់រុំសរសៃជែល 3M Kerracel (3M, Knutsford, UK) គឺជាបង់រុំសរសៃជែល carboxymethylcellulose (CMC) 100% ដែលមិនប្រឆាំងនឹងមេរោគ ដែលត្រូវបានប្រើជាបង់រុំត្រួតពិនិត្យនៅក្នុងការសិក្សានេះ។ បង់រុំប្រាក់ CMC ប្រឆាំងមេរោគចំនួនបីត្រូវបានវាយតម្លៃ គឺបង់រុំ 3M Kerracel Ag (3M, Knutsford, UK) ដែលមានផ្ទុកអំបិលប្រាក់អុកស៊ីហ្សែន (Ag7NO11) 1.7 wt% ក្នុងអ៊ីយ៉ុងប្រាក់វ៉ាឡង់ខ្ពស់ (Ag1+, Ag2+ និង Ag3+)។ ក្នុងអំឡុងពេលរលួយនៃ Ag7NO11 អ៊ីយ៉ុង Ag1+, Ag2+ និង Ag3+ ត្រូវបានបង្កើតឡើងក្នុងសមាមាត្រ 1:2:4។ ទឹកសម្អាង Aquacel Ag Extra ដែលមានផ្ទុកសារធាតុក្លរួប្រាក់ 1.2% (Ag1+) (ConvaTec, Deeside, UK) 13 និងទឹកសម្អាង Aquacel Ag + Extra ដែលមានផ្ទុកសារធាតុក្លរួប្រាក់ 1.2% (Ag1+), EDTA និង benzethonium chloride (ConvaTec, Deeside, UK) 14។
ពពួកបាក់តេរីដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះគឺ Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (Public Health England, Salisbury) និង Staphylococcus aureus NCTC 6571 (Public Health England, Salisbury)។
បាក់តេរីត្រូវបានដាំដុះពេញមួយយប់ក្នុងទឹកស៊ុប Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, UK)។ បន្ទាប់មក ការដាំដុះពេញមួយយប់ត្រូវបានពនលាយ 1:100 ក្នុងទឹកស៊ុប Mueller-Hinton ហើយដាក់ 200 µl លើភ្នាស cyclopore Whatman កម្រាស់ 0.2 µm ដែលគ្មានមេរោគ (Whatman plc, Maidstone, UK) លើចាន Mueller-Hinton agar (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Great Britain)។ ) ការបង្កើត biofilm អាណានិគមនៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 24 ម៉ោង។ biofilm អាណានិគមទាំងនេះត្រូវបានធ្វើតេស្តសម្រាប់ការរួញតូចលោការីត។
កាត់បង់រុំជាបំណែកការ៉េទំហំ 3 សង់ទីម៉ែត្រការ៉េ រួចធ្វើឲ្យសើមជាមុនជាមួយទឹកដែលគ្មានអ៊ីយ៉ុង។ ដាក់បង់រុំលើជីវហ្វីមនៃអាណានិគមនៅលើចានអាហ្គា។ រាល់ជីវហ្វីម 24 ហិកតាត្រូវបានយកចេញ ហើយបាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងជីវហ្វីម (CFU/មីលីលីត្រ) ត្រូវបានវាស់បរិមាណដោយការពនលាយជាបន្តបន្ទាប់ (10−1 ដល់ 10−7) ក្នុងទឹកស៊ុបអព្យាក្រឹត Day-Angle (Merck-Millipore)។ បន្ទាប់ពីភ្ញាស់រយៈពេល 24 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37°C ការរាប់បន្ទះស្តង់ដារត្រូវបានអនុវត្តលើបន្ទះអាហ្គា Mueller-Hinton។ ការព្យាបាល និងចំណុចពេលវេលានីមួយៗត្រូវបានអនុវត្តជាបីដង ហើយការរាប់បន្ទះត្រូវបានធ្វើម្តងទៀតសម្រាប់ការពនលាយនីមួយៗ។
ស្បែកជ្រូកពោះទទួលបានពីជ្រូកញីពណ៌សធំក្នុងរយៈពេល 15 នាទីបន្ទាប់ពីការសម្លាប់ ស្របតាមស្តង់ដារនាំចេញរបស់សហភាពអឺរ៉ុប។ ស្បែកត្រូវបានកោរ និងសម្អាតដោយក្រដាសជូតអាល់កុល បន្ទាប់មកបង្កកនៅសីតុណ្ហភាព -80°C រយៈពេល 24 ម៉ោង ដើម្បីធ្វើឱ្យស្បែកបាត់បង់ភាពរស់រវើក។ បន្ទាប់ពីរលាយ បំណែកស្បែកទំហំ 1 សង់ទីម៉ែត្រការ៉េ ត្រូវបានលាងសម្អាតបីដងជាមួយ PBS សូដ្យូមអ៊ីប៉ូក្លរីត 0.6% និងអេតាណុល 70% រយៈពេល 20 នាទីក្នុងមួយដង។ មុនពេលយកអេពីដេមីសចេញ សូមយកអេតាណុលដែលនៅសល់ចេញដោយលាងសម្អាត 3 ដងក្នុង PBS ដែលគ្មានមេរោគ។ ស្បែកត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងចាន 6 រន្ធ ដែលមានភ្នាសនីឡុងកម្រាស់ 0.45 μm (Merck-Millipore) នៅខាងលើ និងបន្ទះស្រូបយកចំនួន 3 (Merck-Millipore) ដែលមានសេរ៉ូមគោគភ៌ 3 មីលីលីត្រ (Sigma) បន្ថែមជាមួយ Dulbecco's modified Eagle 10%។ Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium – Aldrich Ltd.)។
ជីវហ្វីមអាណានិគមត្រូវបានដាំដុះដូចដែលបានពិពណ៌នាសម្រាប់ការសិក្សាអំពីការប៉ះពាល់ជីវហ្វីម។ បន្ទាប់ពីដាំដុះជីវហ្វីមនៅលើភ្នាសរយៈពេល 72 ម៉ោង ជីវហ្វីមត្រូវបានលាបលើផ្ទៃស្បែកដោយប្រើរង្វិលជុំចាក់មេរោគមាប់មគ ហើយភ្នាសត្រូវបានយកចេញ។ បន្ទាប់មក ជីវហ្វីមត្រូវបានភ្ញាស់នៅលើស្បែកជ្រូករយៈពេល 24 ម៉ោងបន្ថែមនៅសីតុណ្ហភាព 37°C ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យជីវហ្វីមចាស់ទុំ និងស្អិតជាប់នឹងស្បែកជ្រូក។ បន្ទាប់ពីជីវហ្វីមបានចាស់ទុំ និងភ្ជាប់រួច បង់រុំទំហំ 1.5 សង់ទីម៉ែត្រការ៉េ ដែលមានសំណើមជាមុនជាមួយទឹកចម្រោះមាប់មគ ត្រូវបានលាបដោយផ្ទាល់ទៅលើផ្ទៃស្បែក ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 24 ម៉ោង។ បាក់តេរីដែលអាចរស់បានត្រូវបានមើលឃើញដោយការជ្រលក់ពណ៌ដោយលាបសារធាតុប្រតិកម្មរស់បានកោសិកា PrestoBlue (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) ទៅលើផ្ទៃខាងលើនៃរុក្ខជាតិនីមួយៗ ហើយភ្ញាស់វារយៈពេល 5 នាទី។ ប្រើកាមេរ៉ាឌីជីថល Leica DFC425 ដើម្បីថតរូបភាពភ្លាមៗនៅលើមីក្រូទស្សន៍ Leica MZ8។ តំបន់ពណ៌ផ្កាឈូកត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើកម្មវិធី Image Pro កំណែ 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (mediacy.com))។ មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេនត្រូវបានអនុវត្តដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងក្រោម។
បាក់តេរីដែលដាំដុះពេញមួយយប់ត្រូវបានពនលាយ 1:100 ក្នុងទឹកស៊ុប Mueller-Hinton។ សារធាតុវប្បធម៌ចំនួន 200 μl ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងភ្នាស cyclopore Whatman កម្រាស់ 0.2 μm ដែលគ្មានមេរោគ (Whatman, Maidstone, UK) ហើយដាក់លើអាហ្គា Mueller-Hinton។ បន្ទះជីវហ្វីមត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 72 ម៉ោង ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានការបង្កើតជីវហ្វីមចាស់ទុំ។
បន្ទាប់ពីរយៈពេល 3 ថ្ងៃនៃភាពចាស់ទុំនៃជីវហ្វីម បង់រុំទំហំ 3 សង់ទីម៉ែត្រការ៉េត្រូវបានដាក់ដោយផ្ទាល់លើជីវហ្វីម ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 24 ម៉ោង។ បន្ទាប់ពីយកបង់រុំចេញពីផ្ទៃជីវហ្វីមរួច សារធាតុប្រតិកម្ម PrestoBlue Cell Viability Reagent (Invitrogen, Waltham, MA) ចំនួន 1 មីលីលីត្រ ត្រូវបានបន្ថែមទៅលើផ្ទៃនៃជីវហ្វីមនីមួយៗរយៈពេល 20 វិនាទី។ ផ្ទៃត្រូវបានសម្ងួតមុនពេលការផ្លាស់ប្ដូរពណ៌ត្រូវបានថតដោយប្រើកាមេរ៉ាឌីជីថល Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, UK)។
រៀបចំការបណ្តុះមេរោគពេញមួយយប់លើ Mueller-Hinton agar ផ្ទេរអាណានិគមនីមួយៗទៅក្នុងទឹកស៊ុប Mueller-Hinton 10 មីលីលីត្រ ហើយភ្ញាស់លើម៉ាស៊ីនញ័រក្នុងសីតុណ្ហភាព 37°C (100 rpm)។ បន្ទាប់ពីភ្ញាស់ពេញមួយយប់ មេរោគត្រូវបានពនលាយ 1:100 ក្នុងទឹកស៊ុប Mueller-Hinton ហើយ 300 µl ត្រូវបានប្រទះឃើញលើភ្នាសស៊ីក្លូ Whatman រាងជារង្វង់ 0.2 µm (Whatman International, Maidstone, UK) លើ Mueller-Hinton agar ហើយភ្ញាស់ក្នុងសីតុណ្ហភាព 37°C ក្នុងរយៈពេល 72 ម៉ោង។ ជីវហ្វីមដែលចាស់ទុំត្រូវបានលាបលើមុខរបួសដូចបានពិពណ៌នាខាងក្រោម។
ការងារទាំងអស់ជាមួយសត្វត្រូវបានអនុវត្តនៅសាកលវិទ្យាល័យ Manchester ក្រោមអាជ្ញាប័ណ្ណគម្រោងដែលត្រូវបានអនុម័តដោយការិយាល័យសុខុមាលភាពសត្វ និងការពិនិត្យសីលធម៌ (P8721BD27) និងស្របតាមគោលការណ៍ណែនាំដែលបានបោះពុម្ពផ្សាយដោយក្រសួងមហាផ្ទៃក្រោម ASPA កែសម្រួលឆ្នាំ 2012។ អ្នកនិពន្ធទាំងអស់បានប្រកាន់ខ្ជាប់នូវគោលការណ៍ណែនាំសម្រាប់ការមកដល់។ កណ្ដុរ C57BL/6j អាយុប្រាំបីសប្តាហ៍ (Envigo, Oxon, UK) ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការសិក្សាទាំងអស់នៅក្នុង vivo។ កណ្ដុរត្រូវបានចាក់ថ្នាំសណ្តំជាមួយ isoflurane (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, UK) ហើយផ្ទៃខ្នងរបស់វាត្រូវបានកោរ និងសម្អាត។ បន្ទាប់មក កណ្ដុរនីមួយៗត្រូវបានផ្តល់មុខរបួសកាត់ចេញទំហំ 2 × 6 ម.ម ដោយប្រើឧបករណ៍ចាក់ជីវសាស្ត្រ Stiefel (Schuco International, Hertfordshire, UK)។ ចំពោះមុខរបួសដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម សូមលាបជីវហ្វីមអាណានិគមរយៈពេល 72 ម៉ោងដែលដាំដុះនៅលើភ្នាសដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងលើទៅលើស្រទាប់ស្បែកនៃមុខរបួសដោយប្រើរង្វិលជុំចាក់មេរោគភ្លាមៗបន្ទាប់ពីរបួស ហើយបោះចោលភ្នាស។ ការបង់រុំមួយសង់ទីម៉ែត្រការ៉េត្រូវបានសើមជាមុនជាមួយទឹកស្អាតដើម្បីរក្សាបរិយាកាសមុខរបួសឱ្យមានសំណើម។ បង់រុំត្រូវបានលាបដោយផ្ទាល់ទៅលើមុខរបួសនីមួយៗ ហើយគ្របដោយខ្សែភាពយន្ត 3M Tegaderm (3M, Bracknell, UK) និងសារធាតុស្អិតរាវ Mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) លាបជុំវិញគែមដើម្បីផ្តល់ភាពស្អិតបន្ថែម។ ថ្នាំ Buprenorphine (Animalcare, York, UK) ត្រូវបានចាក់ក្នុងកំហាប់ 0.1 mg/kg ជាថ្នាំបំបាត់ការឈឺចាប់។ សម្លាប់កណ្ដុរបីថ្ងៃបន្ទាប់ពីរបួសដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ Schedule 1 ហើយយកចេញ កាត់ជាពីរ និងរក្សាទុកតំបន់មុខរបួសតាមតម្រូវការ។
ការជ្រលក់ពណ៌ Hematoxylin (ThermoFisher Scientific) និង eosin (ThermoFisher Scientific) ត្រូវបានអនុវត្តស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ផ្ទៃរបួស និងការកសាងឡើងវិញនៃស្រទាប់កោសិកាត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើកម្មវិធី Image Pro កំណែ 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD)។
ផ្នែកជាលិកាត្រូវបាន dewax ក្នុង xylene (ThermoFisher Scientific, Loughborough, UK) ធ្វើឱ្យមានសំណើមឡើងវិញជាមួយអេតាណុលដែលបានកម្រិត 100–50% ហើយជ្រលក់មួយរយៈខ្លីក្នុងទឹកដែលគ្មានអ៊ីយ៉ូដ (ThermoFisher Scientific)។ ការវិភាគភាពស៊ាំត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើឧបករណ៍ VectaStain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ អង្គបដិប្រាណបឋមទៅនឹង neutrophils NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) និង macrophages Ms CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, UK) ត្រូវបានពនលាយ 1:100 ក្នុងដំណោះស្រាយរារាំង ហើយបន្ថែមទៅលើផ្ទៃកាត់ បន្ទាប់មកដោយអង្គបដិប្រាណចំនួន 2 គឺ Anti-, VectaStain ABC និង Vector Nova Red Peroxidase (HRP) substrate kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA) ហើយលាបពណ៌ជាមួយ hematoxylin។ រូបភាពត្រូវបានថតដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Olympus BX43 និងកាមេរ៉ាឌីជីថល Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, ចក្រភពអង់គ្លេស)។
សំណាកស្បែកត្រូវបានស្អិតជាប់ក្នុង glutaraldehyde 2.5% និង formaldehyde 4% ក្នុង 0.1 M HEPES (pH 7.4) រយៈពេល 24 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 4°C។ សំណាកត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកដោយប្រើអេតាណុលដែលបានចាត់ថ្នាក់ និងសម្ងួតក្នុង CO2 ដោយប្រើម៉ាស៊ីនសម្ងួតចំណុចសំខាន់ Quorum K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, UK) និងស្រោបដោយលោហធាតុមាស-ប៉ាឡាដ្យូម ដោយប្រើប្រព័ន្ធបញ្ចេញពន្លឺខ្នាតតូច Quorum SC7620។ សំណាកត្រូវបានថតរូបភាពដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន FEI Quanta 250 (ThermoFisher Scientific) ដើម្បីមើលឃើញចំណុចកណ្តាលនៃមុខរបួស។
អ៊ីយ៉ូត Toto-1 (2 μM) ត្រូវបានលាបលើផ្ទៃរបួសកណ្ដុរដែលត្រូវបានកាត់ចេញ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 °C (ThermoFisher Scientific) និងព្យាបាលដោយ Syto-60 (10 μM) នៅសីតុណ្ហភាព 37 °C (ThermoFisher Scientific)។ រូបភាព Z-stack រយៈពេល 15 នាទីត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើ Leica TCS SP8។
ទិន្នន័យចម្លងជីវសាស្រ្ត និងបច្ចេកទេសត្រូវបានដាក់ជាតារាង និងវិភាគដោយប្រើកម្មវិធី Graphpad Prism V9 (កម្មវិធី GraphPad, La Jolla, CA)។ ការវិភាគភាពប្រែប្រួលតែមួយផ្លូវជាមួយនឹងការប្រៀបធៀបច្រើនដោយប្រើតេស្ត post hoc របស់ Dunnett ត្រូវបានប្រើដើម្បីសាកល្បងភាពខុសគ្នារវាងការព្យាបាលនីមួយៗ និងការស្លៀកពាក់ត្រួតពិនិត្យមិនមែនប្រឆាំងមេរោគ។ តម្លៃ p <0.05 ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់។
ប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំសរសៃជែលប្រាក់ត្រូវបានវាយតម្លៃជាលើកដំបូងប្រឆាំងនឹងអាណានិគមជីវហ្វីលមរបស់ Staphylococcus aureus និង Pseudomonas aeruginosa នៅក្នុង vitro។ បង់រុំប្រាក់មានរូបមន្តផ្សេងៗគ្នានៃប្រាក់៖ បង់រុំប្រាក់បែបប្រពៃណីផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag1+; បង់រុំប្រាក់ ដែលអាចផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag1+ បន្ទាប់ពីការបន្ថែម EDTA/BC អាចបំផ្លាញម៉ាទ្រីសជីវហ្វីលម និងធ្វើឱ្យបាក់តេរីប៉ះពាល់នឹងប្រាក់ក្រោមឥទ្ធិពលប្រឆាំងបាក់តេរីនៃអ៊ីយ៉ុងប្រាក់15 និងបង់រុំដែលមានអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែនដែលផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag1+, Ag2+ និង Ag3+។ ប្រសិទ្ធភាពរបស់វាត្រូវបានប្រៀបធៀបជាមួយនឹងបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនប្រឆាំងមេរោគដែលធ្វើពីសរសៃជែល។ បាក់តេរីដែលអាចរស់បានដែលនៅសល់ក្នុងជីវហ្វីលមត្រូវបានវាយតម្លៃរៀងរាល់ 24 ម៉ោងម្តងរយៈពេល 8 ថ្ងៃ (រូបភាពទី 1)។ នៅថ្ងៃទី 5 ជីវហ្វីលមត្រូវបានចាក់ឡើងវិញជាមួយ Staphylococcus aureus 3.85 × 105S ឬ 1.22 × 105P. aeruginosa ដើម្បីវាយតម្លៃការស្តារជីវហ្វីលម។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបង់រុំដែលមិនមែនជាថ្នាំប្រឆាំងមេរោគ ការបង់រុំ Ag1+ មានឥទ្ធិពលតិចតួចបំផុតទៅលើលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរីនៅក្នុងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ Staphylococcus aureus និង Pseudomonas aeruginosa ក្នុងរយៈពេល 5 ថ្ងៃ។ ផ្ទុយទៅវិញ ការបង់រុំដែលមានផ្ទុកអំបិល Ag និងអំបិល Ag1+ + EDTA/BC ដែលមានអុកស៊ីសែន មានប្រសិទ្ធភាពក្នុងការសម្លាប់បាក់តេរីនៅក្នុងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រក្នុងរយៈពេល 5 ថ្ងៃ។ បន្ទាប់ពីការចាក់បញ្ចូលបាក់តេរី planktonic ម្តងហើយម្តងទៀតនៅថ្ងៃទី 5 មិនមានការស្តារឡើងវិញនៃស្រទាប់ជីវសាស្ត្រត្រូវបានគេសង្កេតឃើញទេ (រូបភាពទី 1)។
ការវាស់បរិមាណបាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ Staphylococcus aureus និង Pseudomonas aeruginosa បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់។ អាណានិគមស្រទាប់ជីវសាស្ត្រនៃ Staphylococcus aureus និង Pseudomonas aeruginosa ត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំប្រាក់ ឬបង់រុំមិនមែនប្រឆាំងនឹងមេរោគ ហើយចំនួនបាក់តេរីដែលអាចរស់បានដែលនៅសល់ត្រូវបានកំណត់រៀងរាល់ 24 ម៉ោងម្តង។ បន្ទាប់ពី 5 ថ្ងៃ ស្រទាប់ជីវសាស្ត្រត្រូវបានចាក់ឡើងវិញជាមួយនឹង 3.85 × 105S។ Staphylococcus aureus ឬ 1.22 × 105P។ អាណានិគមនៃ bacterioplankton Pseudomonas aeruginosa ត្រូវបានបង្កើតឡើងជាលក្ខណៈបុគ្គលដើម្បីវាយតម្លៃការស្តារឡើងវិញនៃស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ។ ក្រាហ្វបង្ហាញពីមធ្យម +/- កំហុសស្តង់ដារ។
ដើម្បីមើលឃើញពីឥទ្ធិពលនៃបង់រុំប្រាក់លើភាពរស់រានមានជីវិតរបស់ជីវហ្វីម បង់រុំត្រូវបានអនុវត្តទៅលើជីវហ្វីមចាស់ទុំដែលដាំដុះលើស្បែកជ្រូក ex vivo។ បន្ទាប់ពី 24 ម៉ោង បង់រុំត្រូវបានយកចេញ ហើយជីវហ្វីមត្រូវបានប្រឡាក់ដោយថ្នាំជ្រលក់ពណ៌ខៀវ ដែលត្រូវបានរំលាយដោយបាក់តេរីរស់ទៅជាពណ៌ផ្កាឈូក។ ជីវហ្វីមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំត្រួតពិនិត្យមានពណ៌ផ្កាឈូក ដែលបង្ហាញពីវត្តមាននៃបាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងជីវហ្វីម (រូបភាពទី 2A)។ ផ្ទុយទៅវិញ ជីវហ្វីមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំ Ag oxysols ភាគច្រើនមានពណ៌ខៀវ ដែលបង្ហាញថាបាក់តេរីដែលនៅសល់នៅលើផ្ទៃស្បែកជ្រូកគឺជាបាក់តេរីដែលមិនអាចរស់បាន (រូបភាពទី 2B)។ ពណ៌ខៀវ និងពណ៌ផ្កាឈូកចម្រុះត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងជីវហ្វីមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំដែលមានផ្ទុក Ag1+ ដែលបង្ហាញពីវត្តមាននៃបាក់តេរីដែលអាចរស់បាន និងមិនដែលអាចរស់បាននៅក្នុងជីវហ្វីម (រូបភាពទី 2C) ចំណែកឯបង់រុំ EDTA/BC ដែលមាន Ag1+ ភាគច្រើនមានពណ៌ខៀវជាមួយនឹងចំណុចពណ៌ផ្កាឈូកមួយចំនួន។ បង្ហាញពីតំបន់ដែលមិនរងផលប៉ះពាល់ដោយបង់រុំប្រាក់ (រូបភាពទី 2D)។ ការវាស់បរិមាណនៃតំបន់សកម្ម (ពណ៌ផ្កាឈូក) និងតំបន់អសកម្ម (ពណ៌ខៀវ) បានបង្ហាញថាបំណះត្រួតពិនិត្យមានសកម្មភាព 75% (រូបភាពទី 2E)។ ការបង់រុំ Ag1+ + EDTA/BC ត្រូវបានអនុវត្តស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការបង់រុំអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន ដែលមានអត្រារស់រានមានជីវិត 13% និង 14% រៀងគ្នា។ ការបង់រុំ Ag1+ ក៏បានកាត់បន្ថយលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរីចំនួន 21% ផងដែរ។ បន្ទាប់មក ខ្សែភាពយន្តជីវសាស្ត្រទាំងនេះត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន (SEM)។ បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយនឹងការបង់រុំត្រួតពិនិត្យ និងការបង់រុំ Ag1+ ស្រទាប់នៃ Pseudomonas aeruginosa ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញគ្របដណ្តប់លើស្បែកជ្រូក (រូបភាពទី 2F, H) ចំណែកឯបន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយនឹងការបង់រុំ Ag1+ កោសិកាបាក់តេរីមួយចំនួនតូចត្រូវបានរកឃើញ និងកោសិកាបាក់តេរីមួយចំនួនតូចត្រូវបានរកឃើញនៅខាងក្រោម។ សរសៃកូឡាជែនអាចត្រូវបានចាត់ទុកថាជារចនាសម្ព័ន្ធជាលិកានៃស្បែកជ្រូក (រូបភាពទី 2G)។ បន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយនឹងការបង់រុំ Ag1+ + EDTA/BC បន្ទះបាក់តេរី និងបន្ទះសរសៃកូឡាជែននៅខាងក្រោមអាចមើលឃើញ (រូបភាពទី 2I)។
ការមើលឃើញជីវហ្វីម Pseudomonas aeruginosa បន្ទាប់ពីការព្យាបាលដោយបង់រុំប្រាក់។ (ក-ឃ) លទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរីនៅក្នុងជីវហ្វីម Pseudomonas aeruginosa ដែលដាំដុះលើស្បែកជ្រូកត្រូវបានមើលឃើញដោយប្រើថ្នាំជ្រលក់ PrestoBlue 24 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការព្យាបាលដោយបង់រុំប្រាក់ ឬបង់រុំមិនមែនថ្នាំប្រឆាំងមេរោគ។ បាក់តេរីរស់មានពណ៌ផ្កាឈូក បាក់តេរីមិនរស់រានមានជីវិត និងស្បែកជ្រូកមានពណ៌ខៀវ។ (ង) ការវាស់បរិមាណជីវហ្វីម Pseudomonas aeruginosa ដែលដាំដុះលើស្បែកជ្រូក (ចំណុចពណ៌ផ្កាឈូក) ដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន Image Pro កំណែ 10 (FI) និងត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំប្រាក់ ឬបង់រុំមិនមែនថ្នាំប្រឆាំងមេរោគរយៈពេល 24 ម៉ោង។ របារមាត្រដ្ឋាន SEM = 5 µm។ (ជ-ម) ជីវហ្វីមអាណានិគមដុះលើតម្រង ហើយត្រូវបានជ្រលក់ជាមួយថ្នាំជ្រលក់ PrestoBlue បន្ទាប់ពីភ្ញាស់រយៈពេល 24 ម៉ោងជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់។
ដើម្បីកំណត់ថាតើការប៉ះពាល់ជិតស្និទ្ធរវាងបង់រុំ និងជីវហ្វីមបានប៉ះពាល់ដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំឬអត់ ជីវហ្វីមដែលដាក់លើផ្ទៃរាបស្មើត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំរយៈពេល 24 ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកប្រឡាក់ដោយថ្នាំជ្រលក់ដែលមានប្រតិកម្ម។ ជីវហ្វីមដែលមិនបានព្យាបាលមានពណ៌ផ្កាឈូកចាស់ (រូបភាពទី 2J)។ ផ្ទុយពីជីវហ្វីមដែលបានព្យាបាលដោយបង់រុំដែលមានអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន (រូបភាពទី 2K) ជីវហ្វីមដែលបានព្យាបាលដោយបង់រុំដែលមាន Ag1+ ឬ Ag1+ + EDTA/BC បានបង្ហាញស្នាមពណ៌ផ្កាឈូក (រូបភាពទី 2L,M)។ ពណ៌ផ្កាឈូកនេះបង្ហាញពីវត្តមាននៃបាក់តេរីដែលអាចរស់បាន ហើយត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងតំបន់ដេរនៅក្នុងបង់រុំ។ តំបន់ដេរទាំងនេះបង្កើតជាចន្លោះស្លាប់ដែលអនុញ្ញាតឱ្យបាក់តេរីនៅក្នុងជីវហ្វីមរស់រានមានជីវិត។
ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំប្រាក់នៅក្នុងខ្លួន មុខរបួសដែលត្រូវបានកាត់ចេញកម្រាស់ពេញលេញរបស់សត្វកណ្តុរដែលឆ្លងមេរោគ S. aureus និង P. aeruginosa ចាស់ទុំត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំមិនមែនប្រឆាំងនឹងមេរោគ ឬបង់រុំប្រាក់។ បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃ ការវិភាគរូបភាពម៉ាក្រូស្កុបបានបង្ហាញពីទំហំមុខរបួសតូចជាងមុននៅពេលព្យាបាលដោយបង់រុំអំបិលដែលមានអុកស៊ីសែនបើប្រៀបធៀបទៅនឹងបង់រុំមិនមែនប្រឆាំងនឹងមេរោគ និងបង់រុំប្រាក់ផ្សេងទៀត (រូបភាពទី 3A-H)។ ដើម្បីបញ្ជាក់ពីការសង្កេតទាំងនេះ មុខរបួសត្រូវបានប្រមូលផល ហើយតំបន់មុខរបួស និងការបង្កើតឡើងវិញត្រូវបានវាស់វែងលើផ្នែកជាលិកាដែលមានស្នាមប្រឡាក់ hematoxylin និង eosin ដោយប្រើកម្មវិធី image pro កំណែ 10 (រូបភាពទី 3I-L)។
ឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំប្រាក់លើផ្ទៃរបួស និងការធ្វើឱ្យស្រទាប់ស្បែកឡើងវិញនៃរបួសដែលឆ្លងមេរោគដោយជីវហ្វីម។ (A–H) កោសិកាតូចៗដែលឆ្លងមេរោគដោយជីវហ្វីមនៃ Pseudomonas aeruginosa (A–D) និង Staphylococcus aureus (E–H) បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេលបីថ្ងៃជាមួយនឹងបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនថ្នាំអង់ទីមីកូល បង់រុំអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន បង់រុំ Ag1+ និងបង់រុំ Ag1+។ រូបភាពម៉ាក្រូស្កូបតំណាង។ របួសរបស់សត្វកណ្ដុរដែលមានបង់រុំ Ag1+ + EDTA/BC។ (IL) ការឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa តំណាង ផ្នែកជាលិកាវិទ្យាដែលប្រឡាក់ដោយអេម៉ាតូស៊ីលីន និងអ៊ីអូស៊ីន ដែលប្រើដើម្បីវាស់បរិមាណផ្ទៃរបួស និងការបង្កើតឡើងវិញនៃស្រទាប់ស្បែក។ ការវាស់បរិមាណផ្ទៃរបួស (M, O) និងភាគរយនៃការធ្វើឱ្យស្រទាប់ស្បែកឡើងវិញ (N, P) នៃរបួសដែលឆ្លងមេរោគដោយជីវហ្វីម Pseudomonas aeruginosa (M, N) និង Staphylococcus aureus (O, P) (ក្នុងមួយក្រុមព្យាបាល n = 12)។ ក្រាហ្វបង្ហាញមធ្យម +/- កំហុសស្តង់ដារ។ * មានន័យថា p = < 0.05 ** មានន័យថា p = < 0.01; មាត្រដ្ឋានម៉ាក្រូស្កុប = 2.5 មីលីម៉ែត្រ, មាត្រដ្ឋានជាលិកាវិទ្យា = 500 µm។
ការវាស់បរិមាណផ្ទៃរបួសនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa biofilm (រូបភាពទី 3M) បានបង្ហាញថា របួសដែលបានព្យាបាលដោយ Ag oxysalts មានទំហំរបួសជាមធ្យម 2.5 mm2 ខណៈពេលដែលការបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនប្រឆាំងមេរោគមានទំហំរបួសជាមធ្យម 3.1 mm2 ដែលមិនពិត។ ឈានដល់សារៈសំខាន់ខាងស្ថិតិ (រូបភាពទី 3M)។ p = 0.423)។ របួសដែលបានព្យាបាលដោយ Ag1+ ឬ Ag1+ + EDTA/BC មិនបានបង្ហាញពីការថយចុះនៃផ្ទៃរបួសទេ (3.1 mm2 និង 3.6 mm2 រៀងគ្នា)។ ការព្យាបាលដោយបង់រុំអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែនបានជំរុញការបង្កើតស្រទាប់ស្បែកឡើងវិញក្នុងកម្រិតធំជាងការបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនប្រឆាំងមេរោគ (34% និង 15% រៀងគ្នា; p = 0.029) និង Ag1+ ឬ Ag1+ + EDTA/BC (10% និង 11%) (រូបភាពទី 3N)។
និន្នាការស្រដៀងគ្នានេះនៅក្នុងតំបន់របួស និងការបង្កើតឡើងវិញនៃភ្នាសកោសិកាស្បែកត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគដោយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ S. aureus (រូបភាពទី 30)។ បង់រុំដែលមានផ្ទុកអំបិលប្រាក់ដែលមានអុកស៊ីសែនបានកាត់បន្ថយតំបន់របួស (2.0 mm2) ចំនួន 23% បើប្រៀបធៀបទៅនឹងបង់រុំដែលមិនមែនជាថ្នាំប្រឆាំងមេរោគត្រួតពិនិត្យ (2.6 mm2) ទោះបីជាការថយចុះនេះមិនគួរឱ្យកត់សម្គាល់ក៏ដោយ (p = 0.304) (រូបភាពទី 30)។ លើសពីនេះ តំបន់របួសនៅក្នុងក្រុមព្យាបាលដោយ Ag1+ ត្រូវបានកាត់បន្ថយបន្តិច (2.4 mm2) ខណៈពេលដែលរបួសដែលបានព្យាបាលដោយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ Ag1+ + EDTA/BC មិនបានកាត់បន្ថយតំបន់របួស (2.9 mm2)។ អំបិលអុកស៊ីសែននៃ Ag ក៏បានជំរុញការបង្កើតឡើងវិញនៃភ្នាសកោសិកាស្បែកនៃរបួសដែលឆ្លងមេរោគដោយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ S. aureus (31%) ក្នុងកម្រិតធំជាងការព្យាបាលដោយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រដែលមិនប្រឆាំងមេរោគត្រួតពិនិត្យ (12%, p = 0.003) (រូបភាពទី 3P)។ ការស្លៀកពាក់ Ag1+ (16%, p = 0.903) និងការស្លៀកពាក់ Ag+1 + EDTA/BC (14%, p = 0.965) បានបង្ហាញកម្រិតនៃការបង្កើតឡើងវិញនៃអេពីធីលីលស្រដៀងគ្នានឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ។
ដើម្បីមើលឃើញពីឥទ្ធិពលនៃបង់រុំប្រាក់លើម៉ាទ្រីសជីវហ្វីម ការជ្រលក់ពណ៌អ៊ីយ៉ូដ Toto 1 និង Syto 60 ត្រូវបានអនុវត្ត (រូបភាពទី 4)។ អ៊ីយ៉ូដ Toto 1 គឺជាថ្នាំជ្រលក់ដែលមិនជ្រាបទឹកក្នុងកោសិកា ដែលអាចប្រើដើម្បីមើលឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្រៅកោសិកាបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ ដែលមានច្រើននៅក្នុង EPS នៃជីវហ្វីម។ Syto 60 គឺជាថ្នាំជ្រលក់ដែលជ្រាបចូលកោសិកា ដែលប្រើជាថ្នាំលាបប្រឆាំង16។ ការសង្កេតលើអ៊ីយ៉ូដ Toto 1 និង Syto 60 នៅក្នុងរបួសដែលចាក់ជាមួយជីវហ្វីមនៃ Pseudomonas aeruginosa (រូបភាពទី 4A-D) និង Staphylococcus aureus (រូបភាពទី 4I-L) បានបង្ហាញថា បន្ទាប់ពីការព្យាបាលបង់រុំរយៈពេល 3 ថ្ងៃ EPS នៅក្នុងជីវហ្វីមត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំង។ ការបង់រុំ Ag1+ ដែលគ្មានសមាសធាតុអង់ទីប៊ីយ៉ូទិកបន្ថែមបានកាត់បន្ថយ DNA ដែលគ្មានកោសិកាយ៉ាងច្រើននៅក្នុងរបួសដែលចាក់ជាមួយ Pseudomonas aeruginosa ប៉ុន្តែមានប្រសិទ្ធភាពតិចជាងនៅក្នុងរបួសដែលចាក់ជាមួយ Staphylococcus aureus។
ការថតរូបភាពក្នុងខ្លួននៃជីវហ្វីមរបួសបន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រង ឬការបង់រុំប្រាក់។ រូបភាពកុងហ្វូកាល់នៃ Pseudomonas aeruginosa (A–D) និង Staphylococcus aureus (I–L) ដែលប្រឡាក់ជាមួយ Toto 1 (ពណ៌បៃតង) ដើម្បីមើលឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្រៅកោសិកា ដែលជាសមាសធាតុនៃប៉ូលីមែរជីវហ្វីមក្រៅកោសិកា។ ដើម្បីប្រឡាក់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្នុងកោសិកា សូមប្រើ Syto 60 (ពណ៌ក្រហម)។ អាស៊ីត។ P. មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេននៃរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa (E–H) និង Staphylococcus aureus (M–P) បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រង និងបង់រុំប្រាក់។ របារមាត្រដ្ឋាន SEM = 5 µm។ របារមាត្រដ្ឋានរូបភាពកុងហ្វូកាល់ = 50 µm។
មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេនបានបង្ហាញថា សត្វកណ្ដុរដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa (រូបភាពទី 4E-H) និង Staphylococcus aureus (រូបភាពទី 4M-P) មានបាក់តេរីតិចជាងមុននៅក្នុងរបួសរបស់ពួកវា បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់ទាំងអស់។
ដើម្បីវាយតម្លៃពីឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំប្រាក់លើការរលាកមុខរបួសចំពោះសត្វកណ្ដុរដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម ផ្នែកនៃមុខរបួសដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំត្រួតពិនិត្យ ឬការបង់រុំប្រាក់រយៈពេល 3 ថ្ងៃត្រូវបានប្រឡាក់ពណ៌ដោយប្រព័ន្ធភាពស៊ាំដោយប្រើអង្គបដិប្រាណជាក់លាក់សម្រាប់នឺត្រូហ្វីល និងម៉ាក្រូហ្វាស។ ការកំណត់បរិមាណនឺត្រូហ្វីល និងម៉ាក្រូហ្វាសនៅខាងក្នុង។ ជាលិកាបង្កើតជាដុំៗ។ រូបភាពទី 5)។ ការបង់រុំប្រាក់ទាំងអស់បានកាត់បន្ថយចំនួននឺត្រូហ្វីល និងម៉ាក្រូហ្វាសនៅក្នុងមុខរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបង់រុំដែលមិនមែនជាថ្នាំប្រឆាំងមេរោគបន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេលបីថ្ងៃ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការព្យាបាលជាមួយនឹងការបង់រុំអំបិលប្រាក់ដែលមានអុកស៊ីសែនបានបណ្តាលឱ្យមានការថយចុះកាន់តែច្រើននៃនឺត្រូហ្វីល (p = <0.0001) និងម៉ាក្រូហ្វាស (p = <0.0001) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបង់រុំប្រាក់ផ្សេងទៀតដែលបានធ្វើតេស្ត (រូបភាពទី 5I,J)។ ទោះបីជា Ag1+ + EDTA/BC មានឥទ្ធិពលខ្លាំងជាងលើជីវហ្វីមមុខរបួសក៏ដោយ វាបានកាត់បន្ថយកម្រិតនឺត្រូហ្វីល និងម៉ាក្រូហ្វាសក្នុងកម្រិតតិចជាងការបង់រុំ Ag1+។ របួសកម្រិតមធ្យមដែលឆ្លងមេរោគដោយជីវហ្វីម S. aureus ក៏ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញផងដែរបន្ទាប់ពីបានបង់រុំជាមួយអុកស៊ីសូល Ag (p = <0.0001), Ag1+ (p = 0.0008) និង Ag1++ EDTA/BC (p = 0.0043) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការគ្រប់គ្រង។ និន្នាការស្រដៀងគ្នានេះត្រូវបានគេសង្កេតឃើញសម្រាប់ការថយចុះនឺត្រូភីន។ បង់រុំ (រូបភាពទី 5K)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ មានតែការបង់រុំអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែនប៉ុណ្ណោះដែលបង្ហាញពីការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃចំនួនម៉ាក្រូហ្វាសនៅក្នុងជាលិការ granulation បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការគ្រប់គ្រងនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគដោយជីវហ្វីម S. aureus (p = 0.0339) (រូបភាពទី 5L)។
នឺត្រូហ្វីល និង ម៉ាក្រូហ្វាស ត្រូវបានវាស់វែងនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa និង Staphylococcus aureus បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃជាមួយនឹងការគ្រប់គ្រងមិនមែនថ្នាំប្រឆាំងមេរោគ ឬការបង់រុំប្រាក់។ នឺត្រូហ្វីល (AD) និង ម៉ាក្រូហ្វាស (EH) ត្រូវបានវាស់វែងនៅក្នុងផ្នែកជាលិកាដែលប្រឡាក់ដោយអង្គបដិប្រាណជាក់លាក់សម្រាប់នឺត្រូហ្វីល ឬ ម៉ាក្រូហ្វាស។ ការវាស់វែងនឺត្រូហ្វីល (I និង K) និង ម៉ាក្រូហ្វាស (J និង L) នៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Pseudomonas aeruginosa (I និង J) និង ស្តាហ្វីឡូកូកុកស aureus (K & L)។ N = 12 ក្នុងមួយក្រុម។ ក្រាហ្វបង្ហាញពីកំហុសស្តង់ដារមធ្យម +/- តម្លៃសារៈសំខាន់បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនថ្នាំប្រឆាំងបាក់តេរី * មានន័យថា p = < 0.05, ** មានន័យថា p = < 0.01; *** មានន័យថា p = < 0.001; បង្ហាញថា p = < 0.0001)។
បន្ទាប់មកយើងបានវាយតម្លៃពីឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំប្រាក់លើការព្យាបាលដែលមិនអាស្រ័យលើការឆ្លងមេរោគ។ របួសវះកាត់ដែលមិនឆ្លងមេរោគត្រូវបានព្យាបាលដោយបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនថ្នាំអង់ទីប៊ីយ៉ូទិក ឬបង់រុំប្រាក់រយៈពេល 3 ថ្ងៃ (រូបភាពទី 6)។ ក្នុងចំណោមបង់រុំប្រាក់ដែលបានធ្វើតេស្ត មានតែរបួសដែលបានព្យាបាលដោយបង់រុំអំបិលអុកស៊ីហ្សែនប៉ុណ្ណោះដែលមើលទៅតូចជាងនៅលើរូបភាពម៉ាក្រូស្កូបជាងរបួសដែលបានព្យាបាលដោយក្រុមត្រួតពិនិត្យ (រូបភាពទី 6A-D)។ ការវាស់បរិមាណផ្ទៃរបួសដោយប្រើការវិភាគជាលិកាបានបង្ហាញថាផ្ទៃរបួសជាមធ្យមបន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយបង់រុំ Ag oxysols គឺ 2.35 mm2 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង 2.96 mm2 សម្រាប់របួសដែលបានព្យាបាលដោយក្រុមត្រួតពិនិត្យ ប៉ុន្តែភាពខុសគ្នានេះមិនឈានដល់សារៈសំខាន់ខាងស្ថិតិទេ (p = 0.488) (រូបភាពទី 6I)។ ផ្ទុយទៅវិញ មិនមានការថយចុះនៃផ្ទៃរបួសត្រូវបានគេសង្កេតឃើញបន្ទាប់ពីការព្យាបាលជាមួយបង់រុំ Ag1+ (3.38 mm2, p = 0.757) ឬ Ag1+ + EDTA/BC (4.18 mm2, p = 0.054) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ។ ការកើនឡើងនៃការបង្កើតឡើងវិញនៃអេពីធីលីលត្រូវបានគេសង្កេតឃើញជាមួយនឹងការស្លៀកពាក់ Ag oxysol បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ (30% ទល់នឹង 22% រៀងគ្នា) ទោះបីជាវាមិនឈានដល់សារៈសំខាន់ក៏ដោយ (p = 0.067) នេះគឺមានសារៈសំខាន់ណាស់ ហើយបញ្ជាក់ពីលទ្ធផលពីមុន។ ការស្លៀកពាក់ជាមួយ oxysols ជំរុញការបង្កើតអេពីធីលីលឡើងវិញ។ -ការបង្កើតអេពីធីលីលនៃរបួសដែលមិនឆ្លងមេរោគ17។ ផ្ទុយទៅវិញ ការព្យាបាលជាមួយនឹងការស្លៀកពាក់ Ag1+ ឬ Ag1+ + EDTA/BC មិនមានប្រសិទ្ធភាព ឬបង្ហាញពីការថយចុះនៃការបង្កើតអេពីធីលីលបើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ។
ឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំរបួសប្រាក់លើការព្យាបាលរបួសចំពោះសត្វកណ្ដុរដែលមិនឆ្លងមេរោគជាមួយនឹងការវះកាត់យកចេញទាំងស្រុង។ (AD) រូបភាពម៉ាក្រូស្កុបតំណាងនៃរបួសបន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេលបីថ្ងៃជាមួយនឹងបង់រុំត្រួតពិនិត្យមិនមែនថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច និងបង់រុំប្រាក់។ (EH) ផ្នែករបួសតំណាងដែលប្រឡាក់ដោយអេម៉ាតូស៊ីលីន និងអ៊ីអូស៊ីន។ ការវាស់បរិមាណផ្ទៃរបួស (I) និងភាគរយនៃការធ្វើឱ្យកោសិកាឡើងវិញ (J) ត្រូវបានគណនាពីផ្នែកជាលិកាវិទ្យានៅចំណុចកណ្តាលនៃរបួសដោយប្រើកម្មវិធីវិភាគរូបភាព (n = 11–12 ក្នុងមួយក្រុមព្យាបាល)។ ក្រាហ្វបង្ហាញមធ្យម +/- កំហុសស្តង់ដារ។ * មានន័យថា p = <0.05។
ប្រាក់មានប្រវត្តិប្រើប្រាស់យូរអង្វែងជាការព្យាបាលដោយថ្នាំប្រឆាំងមេរោគក្នុងការព្យាបាលរបួស ប៉ុន្តែរូបមន្ត និងវិធីសាស្ត្រចែកចាយផ្សេងៗគ្នាជាច្រើនអាចបណ្តាលឱ្យមានភាពខុសគ្នានៃប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគ 18។ លើសពីនេះ លក្ខណៈសម្បត្តិអង់ទីប៊ីយ៉ូហ្វីមនៃប្រព័ន្ធចែកចាយប្រាក់ជាក់លាក់មិនទាន់ត្រូវបានយល់ច្បាស់នៅឡើយទេ។ ទោះបីជាការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម៉ាស៊ីនមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងបាក់តេរីប្លង់តូនិចក៏ដោយ ជាទូទៅវាមិនសូវមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមទេ 19។ បាក់តេរីប្លង់តូនិចត្រូវបានម៉ាក្រូហ្វាសបំបែកកោសិកាដោយ phagocytos យ៉ាងងាយស្រួល ប៉ុន្តែនៅក្នុងជីវហ្វីម កោសិកាដែលប្រមូលផ្តុំបង្កបញ្ហាបន្ថែមដោយកំណត់ការឆ្លើយតបរបស់ម៉ាស៊ីនដល់កម្រិតដែលកោសិកាភាពស៊ាំអាចឆ្លងកាត់ apoptosis និងបញ្ចេញកត្តារលាកដើម្បីបង្កើនការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ 20។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថា កោសិកាឈាមសមួយចំនួនអាចជ្រាបចូលទៅក្នុងជីវហ្វីម 21 ប៉ុន្តែមិនអាចបំបែកកោសិកាបាក់តេរីបានទេ នៅពេលដែលការការពារនេះត្រូវបានចុះខ្សោយ 22។ វិធីសាស្រ្តរួមគួរតែត្រូវបានប្រើដើម្បីគាំទ្រការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម៉ាស៊ីនប្រឆាំងនឹងការឆ្លងមេរោគជីវហ្វីមរបួស។ ការសម្អាតមុខរបួសអាចរំខានដល់ជីវហ្វីមដោយរាងកាយ និងយកជីវបន្ទុកភាគច្រើនចេញ ប៉ុន្តែការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម៉ាស៊ីនអាចគ្មានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមដែលនៅសល់ ជាពិសេសប្រសិនបើការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម៉ាស៊ីនត្រូវបានចុះខ្សោយ។ ដូច្នេះ ការព្យាបាលដោយថ្នាំប្រឆាំងមេរោគដូចជាបង់រុំប្រាក់អាចជួយគាំទ្រដល់ការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម្ចាស់ផ្ទះ និងលុបបំបាត់ការឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម។ សមាសធាតុ កំហាប់ ភាពរលាយ និងស្រទាប់ខាងក្រោមចែកចាយអាចមានឥទ្ធិពលលើប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគនៃប្រាក់។ ក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ ការរីកចម្រើននៃបច្ចេកវិទ្យាកែច្នៃប្រាក់បានធ្វើឱ្យបង់រុំទាំងនេះមានប្រសិទ្ធភាពជាងមុន9,23។ នៅពេលដែលបច្ចេកវិទ្យាបង់រុំប្រាក់រីកចម្រើន វាជាការសំខាន់ក្នុងការយល់ដឹងអំពីប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំទាំងនេះក្នុងការគ្រប់គ្រងការឆ្លងមេរោគមុខរបួស និងសំខាន់ជាងនេះទៅទៀត ផលប៉ះពាល់នៃទម្រង់ដ៏មានឥទ្ធិពលនៃប្រាក់ទាំងនេះទៅលើបរិស្ថានមុខរបួស និងការព្យាបាល។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ យើងបានប្រៀបធៀបប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំប្រាក់កម្រិតខ្ពស់ពីរជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់ធម្មតាដែលផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag1+ ប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមដោយប្រើគំរូក្នុងវីត្រូ និងក្នុងវីវ៉ូផ្សេងៗគ្នា។ យើងក៏បានវាយតម្លៃពីឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំទាំងនេះទៅលើបរិស្ថានរបួស និងការព្យាបាលដែលមិនពឹងផ្អែកលើការឆ្លងមេរោគ។ ដើម្បីកាត់បន្ថយឥទ្ធិពលនៃម៉ាទ្រីសចែកចាយ ការបង់រុំប្រាក់ទាំងអស់ដែលត្រូវបានសាកល្បងត្រូវបានផ្សំឡើងពីកាបូស៊ីមេទីលសែលុយឡូស។
ការវាយតម្លៃបឋមរបស់យើងលើការស្លៀកពាក់ប្រាក់ទាំងនេះប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមដែលបង្កឡើងដោយ Pseudomonas aeruginosa និង Staphylococcus aureus បង្ហាញថា មិនដូចការស្លៀកពាក់ Ag1+ បែបប្រពៃណីទេ ការស្លៀកពាក់ប្រាក់កម្រិតខ្ពស់ពីរគឺ Ag1+ + EDTA/BC និងអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន មានប្រសិទ្ធភាពសម្លាប់បាក់តេរីជីវហ្វីមក្នុងរយៈពេលពីរបីថ្ងៃ។ លើសពីនេះ ការស្លៀកពាក់ទាំងនេះការពារការបង្កើតឡើងវិញនៃជីវហ្វីមនៅពេលប៉ះពាល់នឹងបាក់តេរីផ្លាន់តូនិចម្តងហើយម្តងទៀត។ ការស្លៀកពាក់ Ag1+ មានផ្ទុកក្លរួប្រាក់ ដែលជាសមាសធាតុប្រាក់ និងម៉ាទ្រីសមូលដ្ឋានដូចគ្នានឹង Ag1+ + EDTA/BC ហើយមានឥទ្ធិពលមានកម្រិតលើលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរីនៅក្នុងជីវហ្វីមក្នុងរយៈពេលដូចគ្នា។ ការសង្កេតឃើញថា ការស្លៀកពាក់ Ag1+ + EDTA/BC មានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីមជាងការស្លៀកពាក់ Ag1+ ដែលមានម៉ាទ្រីស និងសមាសធាតុប្រាក់ដូចគ្នា គាំទ្រគំនិតដែលថាគ្រឿងផ្សំបន្ថែមត្រូវបានទាមទារដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃក្លរួប្រាក់ប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីម ដូចដែលត្រូវបានរាយការណ៍នៅកន្លែងផ្សេងទៀត15។ លទ្ធផលទាំងនេះគាំទ្រគំនិតដែលថា BC និង EDTA ដើរតួនាទីបន្ថែមដែលរួមចំណែកដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃការស្លៀកពាក់ជារួម ហើយអវត្តមាននៃសមាសធាតុនេះនៅក្នុងការស្លៀកពាក់ Ag1+ អាចបានរួមចំណែកដល់ការបរាជ័យក្នុងការបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពនៅក្នុង vitro។ យើងបានរកឃើញថា ការស្លៀកពាក់អំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែនដែលផលិតអ៊ីយ៉ុង Ag2+ និង Ag3+ បានបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងបាក់តេរីខ្លាំងជាង Ag1+ និងនៅកម្រិតស្រដៀងគ្នាទៅនឹង Ag1+ + EDTA/BC។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដោយសារតែសក្តានុពល redox ខ្ពស់ វាមិនច្បាស់ទេថាតើអ៊ីយ៉ុង Ag3+ នៅតែសកម្ម និងមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹង biofilms របួសបានយូរប៉ុណ្ណា ហើយដូច្នេះសមនឹងទទួលបានការសិក្សាបន្ថែមទៀត។ លើសពីនេះ មានការស្លៀកពាក់ផ្សេងៗគ្នាជាច្រើនដែលបង្កើតអ៊ីយ៉ុង Ag1+ ដែលមិនត្រូវបានសាកល្បងនៅក្នុងការសិក្សានេះ។ ការស្លៀកពាក់ទាំងនេះត្រូវបានផ្សំឡើងពីសមាសធាតុប្រាក់ កំហាប់ និងម៉ាទ្រីសមូលដ្ឋានផ្សេងៗគ្នា ដែលអាចមានឥទ្ធិពលលើការចែកចាយអ៊ីយ៉ុង Ag1+ និងប្រសិទ្ធភាពរបស់វាប្រឆាំងនឹង biofilms។ វាក៏គួរឱ្យកត់សម្គាល់ផងដែរថា មានគំរូនៅក្នុង vitro និងនៅក្នុង vivo ជាច្រើនដែលត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការស្លៀកពាក់របួសប្រឆាំងនឹង biofilms។ ប្រភេទនៃគំរូដែលបានប្រើ ក៏ដូចជាមាតិកាអំបិល និងប្រូតេអ៊ីននៃមេឌៀដែលប្រើនៅក្នុងគំរូទាំងនេះ នឹងមានឥទ្ធិពលលើប្រសិទ្ធភាពនៃការស្លៀកពាក់។ នៅក្នុងគំរូ in vivo របស់យើង យើងបានអនុញ្ញាតឱ្យ biofilm ចាស់ទុំនៅក្នុង vitro ហើយបន្ទាប់មកបានផ្ទេរវាទៅលើផ្ទៃស្បែកនៃមុខរបួស។ ការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់កណ្ដុរម្ចាស់ផ្ទះមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងបាក់តេរី planktonic ដែលលាបលើមុខរបួស ដោយហេតុនេះបង្កើតជា biofilm នៅពេលដែលមុខរបួសជាសះស្បើយ។ ការបន្ថែម biofilm ចាស់ទុំទៅក្នុងមុខរបួសកំណត់ប្រសិទ្ធភាពនៃការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម្ចាស់ផ្ទះចំពោះការបង្កើត biofilm ដោយអនុញ្ញាតឱ្យ biofilm ចាស់ទុំបង្កើតខ្លួនវានៅក្នុងមុខរបួសមុនពេលការព្យាបាលអាចចាប់ផ្តើម។ ដូច្នេះ គំរូរបស់យើងអនុញ្ញាតឱ្យយើងវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំប្រឆាំងនឹងមេរោគលើ biofilm ចាស់ទុំមុនពេលមុខរបួសចាប់ផ្តើមជាសះស្បើយ។
យើងក៏បានរកឃើញផងដែរថា ការស្លៀកពាក់ឱ្យសមល្មមបានជះឥទ្ធិពលដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃបង់រុំប្រាក់លើស្រទាប់ជីវសាស្ត្រដែលដាំដុះក្នុងវីត្រូ និងស្បែកជ្រូក។ ការប៉ះពាល់យ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយមុខរបួសត្រូវបានចាត់ទុកថាមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគនៃបង់រុំ24,25។ បង់រុំដែលមានអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែនមានទំនាក់ទំនងយ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រចាស់ទុំ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃចំនួនបាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងស្រទាប់ជីវសាស្ត្របន្ទាប់ពី 24 ម៉ោង។ ផ្ទុយទៅវិញ នៅពេលដែលបានព្យាបាលដោយបង់រុំ Ag1+ និង Ag1+ + EDTA/BC បាក់តេរីដែលអាចរស់បានមួយចំនួនធំនៅតែមាន។ បង់រុំទាំងនេះមានស្នាមដេរតាមបណ្តោយប្រវែងទាំងមូលនៃបង់រុំ ដែលបង្កើតជាចន្លោះស្លាប់ដែលការពារការប៉ះពាល់យ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ។ នៅក្នុងការសិក្សាក្នុងវីត្រូរបស់យើង តំបន់ដែលមិនប៉ះគ្នាទាំងនេះបានការពារការសម្លាប់បាក់តេរីដែលអាចរស់បាននៅក្នុងស្រទាប់ជីវសាស្ត្រ។ យើងបានវាយតម្លៃពីលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតរបស់បាក់តេរីតែបន្ទាប់ពីការព្យាបាល 24 ម៉ោង។ យូរៗទៅ នៅពេលដែលបង់រុំកាន់តែឆ្អែត អាចមានចន្លោះស្លាប់តិចជាងមុន ដែលកាត់បន្ថយតំបន់សម្រាប់បាក់តេរីដែលអាចរស់បានទាំងនេះ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នេះបង្ហាញពីសារៈសំខាន់នៃសមាសភាពនៃបង់រុំ មិនមែនគ្រាន់តែប្រភេទប្រាក់នៅក្នុងបង់រុំនោះទេ។
ខណៈពេលដែលការសិក្សានៅក្នុងវីត្រូមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការប្រៀបធៀបប្រសិទ្ធភាពនៃបច្ចេកវិទ្យាប្រាក់ផ្សេងៗគ្នា វាក៏សំខាន់ផងដែរក្នុងការយល់ដឹងអំពីផលប៉ះពាល់នៃការបង់រុំទាំងនេះទៅលើជីវហ្វីមនៅក្នុងខ្លួន ដែលជាលិកាម៉ាស៊ីន និងការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរួមចំណែកដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីម។ ឥទ្ធិពលនៃការបង់រុំទាំងនេះទៅលើជីវហ្វីមរបួសត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន និងការជ្រលក់ពណ៌ EPS នៃជីវហ្វីមដោយប្រើថ្នាំជ្រលក់ DNA ក្នុងកោសិកា និងក្រៅកោសិកា។ យើងបានរកឃើញថា បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃ ការបង់រុំទាំងអស់មានប្រសិទ្ធភាពក្នុងការកាត់បន្ថយ DNA ដែលគ្មានកោសិកានៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីម ប៉ុន្តែការបង់រុំ Ag1+ មានប្រសិទ្ធភាពតិចជាងនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគ Staphylococcus aureus។ មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេនក៏បានបង្ហាញផងដែរថា បាក់តេរីតិចជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់មានវត្តមាននៅក្នុងរបួសដែលបានព្យាបាលដោយបង់រុំប្រាក់ ទោះបីជាវាកាន់តែច្បាស់ជាមួយនឹងការបង់រុំអំបិល Ag ដែលមានអុកស៊ីសែន និងការបង់រុំ Ag1+ + EDTA/BC បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបង់រុំ Ag1+ ក៏ដោយ។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា បង់រុំប្រាក់ដែលបានធ្វើតេស្តមានកម្រិតនៃផលប៉ះពាល់ខុសៗគ្នាទៅលើរចនាសម្ព័ន្ធជីវហ្វីម ប៉ុន្តែគ្មានបង់រុំប្រាក់ណាមួយអាចលុបបំបាត់ជីវហ្វីមបានទេ ដែលគាំទ្រដល់តម្រូវការសម្រាប់វិធីសាស្រ្តរួមមួយចំពោះការព្យាបាលការឆ្លងមេរោគជីវហ្វីមមុខរបួស។ ការប្រើប្រាស់ខ្សែដៃប្រាក់។ ការព្យាបាលត្រូវបានបន្តដោយការសម្អាតរាងកាយដើម្បីយកជីវហ្វីមភាគច្រើនចេញ។
របួសរ៉ាំរ៉ៃច្រើនតែស្ថិតក្នុងស្ថានភាពរលាកធ្ងន់ធ្ងរ ដោយកោសិការលាកលើសនៅសល់ក្នុងជាលិការបួសរយៈពេលយូរ ដែលបណ្តាលឱ្យខូចខាតជាលិកា និងធ្វើឱ្យអុកស៊ីសែនដែលត្រូវការសម្រាប់ការរំលាយអាហារកោសិកា និងមុខងារមានប្រសិទ្ធភាពនៅក្នុងរបួសថយចុះ26។ ជីវហ្វីលធ្វើឱ្យបរិយាកាសរបួសដ៏អាក្រក់នេះកាន់តែធ្ងន់ធ្ងរឡើង ដោយប៉ះពាល់អវិជ្ជមានដល់ការព្យាបាលតាមវិធីផ្សេងៗគ្នា រួមទាំងការរារាំងការរីកសាយ និងការធ្វើចំណាកស្រុកកោសិកា និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃស៊ីតូគីនបង្ករលាក27។ នៅពេលដែលបង់រុំប្រាក់កាន់តែមានប្រសិទ្ធភាព វាជាការសំខាន់ក្នុងការយល់ដឹងអំពីផលប៉ះពាល់ដែលវាមានទៅលើបរិស្ថានរបួស និងការព្យាបាល។
គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ណាស់ ទោះបីជាការបង់រុំប្រាក់ទាំងអស់ប៉ះពាល់ដល់សមាសធាតុជីវហ្វីមក៏ដោយ មានតែការបង់រុំអំបិលប្រាក់ដែលមានអុកស៊ីសែនប៉ុណ្ណោះដែលបង្កើនការបង្កើតស្រទាប់អេពីថេលីលឡើងវិញនៃរបួសដែលឆ្លងមេរោគទាំងនេះ។ ទិន្នន័យទាំងនេះគាំទ្រដល់ការរកឃើញពីមុនរបស់យើង17 និងការរកឃើញរបស់ Kalan et al. (2017)28 ដែលបានបង្ហាញពីទម្រង់សុវត្ថិភាព និងជាតិពុលល្អនៃអំបិលប្រាក់ដែលមានអុកស៊ីសែន ដោយសារកំហាប់ប្រាក់ទាបមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងនឹងជីវហ្វីម។
ការសិក្សាបច្ចុប្បន្នរបស់យើងបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នានៃបច្ចេកវិទ្យាប្រាក់រវាងការបង់រុំប្រាក់ប្រឆាំងនឹងមេរោគ និងផលប៉ះពាល់នៃបច្ចេកវិទ្យានេះទៅលើបរិស្ថានរបួស និងការព្យាបាលដោយមិនពឹងផ្អែកលើការឆ្លងមេរោគ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ លទ្ធផលទាំងនេះខុសពីការសិក្សាពីមុនដែលបង្ហាញថា ការបង់រុំ Ag1+ + EDTA/BC បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវប៉ារ៉ាម៉ែត្រនៃការព្យាបាលត្រចៀកទន្សាយដែលរងរបួសនៅក្នុងខ្លួន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នេះអាចបណ្តាលមកពីភាពខុសគ្នានៃគំរូសត្វ ពេលវេលាវាស់វែង និងវិធីសាស្រ្តអនុវត្តបាក់តេរី29។ ក្នុងករណីនេះ ការវាស់វែងរបួសត្រូវបានធ្វើឡើង 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីរបួស ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យគ្រឿងផ្សំសកម្មនៃការបង់រុំធ្វើសកម្មភាពលើជីវហ្វីលក្នុងរយៈពេលយូរជាងនេះ។ នេះត្រូវបានគាំទ្រដោយការសិក្សាមួយដែលបានបង្ហាញថា ដំបៅជើងដែលឆ្លងមេរោគដែលបានព្យាបាលដោយ Ag1+ + EDTA/BC ដំបូងឡើយបានកើនឡើងទំហំបន្ទាប់ពីការព្យាបាលមួយសប្តាហ៍ ហើយបន្ទាប់មកក្នុងរយៈពេល 3 សប្តាហ៍បន្ទាប់នៃការព្យាបាលជាមួយ Ag1+ + EDTA/BC និងក្នុងរយៈពេល 4 សប្តាហ៍នៃការប្រើប្រាស់ថ្នាំដែលមិនមែនជាថ្នាំប្រឆាំងមេរោគ។ ការបង់រុំ CMC ដើម្បីកាត់បន្ថយទំហំនៃដំបៅ30។
ទម្រង់ និងកំហាប់ជាក់លាក់នៃប្រាក់ពីមុនត្រូវបានបង្ហាញថាមានជាតិពុលកោសិកានៅក្នុងវីត្រូ 11 ប៉ុន្តែលទ្ធផលនៅក្នុងវីត្រូទាំងនេះមិនតែងតែបកប្រែទៅជាផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមាននៅក្នុងវីវ៉ូនោះទេ។ លើសពីនេះ ការរីកចម្រើននៃបច្ចេកវិទ្យាប្រាក់ និងការយល់ដឹងកាន់តែច្បាស់អំពីសមាសធាតុប្រាក់ និងកំហាប់នៅក្នុងបង់រុំបាននាំឱ្យមានការអភិវឌ្ឍនៃបង់រុំប្រាក់ជាច្រើនដែលមានសុវត្ថិភាព និងមានប្រសិទ្ធភាព។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅពេលដែលបច្ចេកវិទ្យាបង់រុំប្រាក់រីកចម្រើន វាជាការសំខាន់ក្នុងការយល់ដឹងពីផលប៉ះពាល់នៃបង់រុំទាំងនេះទៅលើបរិស្ថានរបួស31,32,33។ ពីមុនវាត្រូវបានរាយការណ៍ថាអត្រាកើនឡើងនៃការឡើងស្រទាប់អេពីថេលីលឡើងវិញត្រូវគ្នាទៅនឹងសមាមាត្រកើនឡើងនៃម៉ាក្រូហ្វាស M2 ប្រឆាំងនឹងការរលាកបើប្រៀបធៀបទៅនឹងប្រភេទ M1 ដែលបង្កការរលាក។ នេះត្រូវបានកត់សម្គាល់នៅក្នុងគំរូកណ្ដុរមុនដែលបង់រុំអ៊ីដ្រូហ្សែលប្រាក់ត្រូវបានប្រៀបធៀបជាមួយនឹងស៊ុលហ្វាឌីយ៉ាហ្សីនប្រាក់ និងអ៊ីដ្រូហ្សែលមិនមែនប្រឆាំងមេរោគ34។
របួសរ៉ាំរ៉ៃអាចបង្ហាញពីការរលាកហួសប្រមាណ ហើយវាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាវត្តមាននៃណឺត្រូហ្វីលលើសអាចបង្កគ្រោះថ្នាក់ដល់ការព្យាបាលរបួស35។ នៅក្នុងការសិក្សាមួយលើសត្វកណ្តុរដែលខ្សោយណឺត្រូហ្វីល វត្តមាននៃណឺត្រូហ្វីលធ្វើឱ្យការបង្កើតឡើងវិញយឺត។ វត្តមាននៃណឺត្រូហ្វីលលើសនាំឱ្យមានកម្រិតខ្ពស់នៃប្រូតេអាស និងប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម ដូចជាស៊ុយភើរអុកស៊ីត និងអ៊ីដ្រូសែនប៉េរ៉ុកស៊ីត ដែលជាប់ទាក់ទងនឹងរបួសរ៉ាំរ៉ៃ និងជាសះស្បើយយឺត37,38។ ដូចគ្នានេះដែរ ការកើនឡើងនៃចំនួនម៉ាក្រូហ្វាស ប្រសិនបើមិនអាចគ្រប់គ្រងបាន អាចនាំឱ្យមានការព្យាបាលរបួសយឺត39។ ការកើនឡើងនេះមានសារៈសំខាន់ជាពិសេស ប្រសិនបើម៉ាក្រូហ្វាសមិនអាចផ្លាស់ប្តូរពីលក្ខណៈបង្ករលាកទៅជាលក្ខណៈបង្កព្យាបាល ដែលបណ្តាលឱ្យរបួសមិនអាចចេញពីដំណាក់កាលរលាកនៃការព្យាបាល40។ យើងបានសង្កេតឃើញការថយចុះនៃណឺត្រូហ្វីល និងម៉ាក្រូហ្វាសនៅក្នុងរបួសដែលឆ្លងមេរោគជីវហ្វីល បន្ទាប់ពីការព្យាបាលរយៈពេល 3 ថ្ងៃជាមួយនឹងបង់រុំប្រាក់ទាំងអស់ ប៉ុន្តែការថយចុះកាន់តែច្បាស់ជាមួយនឹងបង់រុំអំបិលដែលមានអុកស៊ីសែន។ ការថយចុះនេះអាចជាលទ្ធផលផ្ទាល់នៃការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំចំពោះប្រាក់ ការឆ្លើយតបទៅនឹងការថយចុះនៃជីវសាស្រ្ត ឬរបួសស្ថិតក្នុងដំណាក់កាលក្រោយនៃការជាសះស្បើយ ដូច្នេះកោសិកាភាពស៊ាំនៅក្នុងរបួសត្រូវបានកាត់បន្ថយ។ ការកាត់បន្ថយចំនួនកោសិការលាកនៅក្នុងរបួសអាចរក្សាបរិយាកាសអំណោយផលដល់ការជាសះស្បើយនៃរបួស។ យន្តការនៃសកម្មភាពនៃរបៀបដែល Ag oxysalt ជំរុញការព្យាបាលដែលមិនពឹងផ្អែកលើការឆ្លងមេរោគគឺមិនច្បាស់លាស់ទេ ប៉ុន្តែសមត្ថភាពរបស់ Ag oxysalt ក្នុងការផលិតអុកស៊ីសែន និងបំផ្លាញកម្រិតដែលបង្កគ្រោះថ្នាក់នៃអ៊ីដ្រូសែន peroxide ដែលជាអ្នកសម្របសម្រួលនៃការរលាក អាចពន្យល់ពីរឿងនេះ ហើយត្រូវការការសិក្សាបន្ថែម17។
របួសរ៉ាំរ៉ៃដែលឆ្លងមេរោគដែលមិនជាសះស្បើយបង្កបញ្ហាសម្រាប់ទាំងវេជ្ជបណ្ឌិត និងអ្នកជំងឺ។ ទោះបីជាការបង់រុំជាច្រើនអះអាងពីប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគក៏ដោយ ការស្រាវជ្រាវកម្រផ្តោតលើកត្តាសំខាន់ៗផ្សេងទៀតដែលជះឥទ្ធិពលដល់មីក្រូបរិស្ថានរបួស។ ការសិក្សានេះបង្ហាញថា បច្ចេកវិទ្យាប្រាក់ផ្សេងៗគ្នាមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគខុសៗគ្នា និងសំខាន់ជាងនេះទៅទៀត ផលប៉ះពាល់ផ្សេងៗគ្នាលើបរិស្ថានរបួស និងការជាសះស្បើយ ដោយមិនគិតពីការឆ្លងមេរោគ។ ទោះបីជាការសិក្សានៅក្នុងវីត្រូ និងនៅក្នុងវីវ៉ូទាំងនេះបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំទាំងនេះក្នុងការព្យាបាលការឆ្លងមេរោគរបួស និងជំរុញការព្យាបាលក៏ដោយ ការសាកល្បងគ្រប់គ្រងដោយចៃដន្យគឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការបង់រុំទាំងនេះនៅក្នុងគ្លីនិក។
សំណុំទិន្នន័យដែលបានប្រើប្រាស់ និង/ឬវិភាគក្នុងអំឡុងពេលសិក្សាបច្ចុប្បន្នអាចរកបានពីអ្នកនិពន្ធដែលត្រូវគ្នាតាមការស្នើសុំសមហេតុផល។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១៥ ខែកក្កដា ឆ្នាំ ២០២៤